Peptit sentezi sürecindeki ortak sorunlar ve çözümler aşağıdaki hususları içerir:
Peptit içeriği: Peptit içeriği, bir numunedeki peptit maddelerinin, peptit olmayan maddelere göre yüzdesini ifade eder. Peptit ürünlerinde, peptidin kendisine ek olarak, su, absorbe edilen solventler, koordinasyon iyonları ve tuzlar gibi üretim prosesi sırasında ortaya çıkan tuz dışı bileşenler de dahildir.
Kimyasal stabilite:
Deamidasyon reaksiyonu: Asn/Gln kalıntıları, Asp/Glu'yu oluşturmak üzere kolayca hidrolize edilir.
Hidroliz: Peptitlerdeki peptit bağları, özellikle Asp'nin katılımıyla oluşturulanlar, özellikle Asp Pro ve Asp Gly peptit bağları hidroliz yoluyla kolayca kırılır.
Rasemizasyon reaksiyonu: Gly dışındaki tüm amino asit kalıntıları kiral alfa karbon atomlarına sahiptir ve alkalin kataliz altında rasemizasyon reaksiyonuna eğilimlidir. Asp kalıntıları rasemizasyon reaksiyonlarına en yatkın olanlardır.
- eliminasyon bozunması: Cys, Ser, Thr, Phe, Tyr ve diğer kalıntıların tümü, alkalin pH'ta meydana gelme olasılığı daha yüksek olan ve sıcaklık ve metal iyonlarından etkilenen eliminasyon yoluyla bozunabilir
Fiziksel stabilite:
Denatürasyon, adsorpsiyon, agregasyon veya çökelme: Peptit denatürasyonu genellikle üçüncül ve ikincil yapıların tahrip edilmesiyle ilgilidir. Denatüre durumda peptitler kimyasal reaksiyonlara daha yatkındır ve aktivitelerinin geri kazanılması zordur. Denatürasyon işlemi sırasında oluşan ara ürün düşük çözünürlüğe sahiptir ve toplanmaya ve çökelmeye eğilimlidir.
koruma:
En iyi saklama koşulları: Peptitler genellikle, özellikle dondurarak kurutmadan sonra -20 derecede çok stabil olan ve -20 derecelik bir kurutucuda saklanan, dondurularak kurutulmuş toz formunda saklanır. Çoğu peptid bu sıcaklıkta birkaç yıl boyunca değişmeden saklanabilir. Nemin etkisini azaltmak için, dondurularak kurutulmuş peptitler havaya maruz bırakılmadan önce kuru koşullar altında oda sıcaklığına getirilmelidir.
Ambalajlama: Hesheng Biyoteknoloji, tekrarlanan donma-çözülme döngülerinden kaçınmak, kapların açılma ve kapanma sayısını azaltmak, böylece uygunsuz kullanım veya bakteriyel kontaminasyon olasılığını azaltmak ve peptitlerin stabilitesini sağlamak için küçük ambalajlamayı önerir.
Saflık testi:
Saflık garantisi: Teslim edilen tüm peptitler gerekli saflığa ulaşmıştır ve standardı karşılamayan peptitler atılacaktır. HPLC ve MS saptama sonuçları, ana safsızlıkları görüntülerken peptidin saflığını ve moleküler ağırlığını doğrulayabilir.
Amino asit analizi veya element analizi gibi diğer tespit yöntemleri, peptidlerin amino asit kompozisyonunu, peptid doğrulamanın tamamlayıcı bir yolu olarak doğrulayabilir.
Sentez teknolojisi:
Katı fazlı peptid sentezi: Katı fazlı peptid sentezi, ara ürünlerin saflaştırılmasını gerektirmez, sürekli sentez süreçlerine izin verir ve peptid sentezinin otomasyonunun temelini oluşturur. Fmoc kimyasal sentezine dayalı olarak hedef peptid, C-terminal amino asidinin karboksil grubunun çözünmeyen bir polimer reçineye kovalent olarak bağlanması ve ardından amino asidin amino grubundan başlanmasıyla sentezlendi.
Yukarıdaki içerik, kimyasal stabilite, fiziksel stabilite, saklama koşulları, saflık testi vb. gibi birçok hususu kapsayan peptid sentezindeki yaygın sorunları ve karşı önlemleri özetlemektedir.