Peptit araştırma ve gelişimi alanında, katalog peptitlerinin saflığı çok önemlidir. Özel bir katalog peptit tedarikçisi olarak, müşterilerimize yüksek kaliteli ürünler sağlamanın önemini anlıyoruz. Bazen, ilk sentez ve saflaştırma süreçlerindeki en iyi çabalarımıza rağmen, katalog peptitlerinin daha fazla saflaştırılmasına ihtiyaç olabilir. Bu blogda, gerektiğinde katalog peptitlerini daha fazla arıtmak için çeşitli yöntem ve düşünceleri araştıracağız.
Neden daha fazla saflaştırma?
Katalog peptitlerinin daha fazla saflaştırılmasının gerekli olmasının birkaç nedeni vardır. Birincisi, hücre bazlı deneyler, in vivo çalışmalar veya yapısal biyoloji araştırmaları gibi oldukça hassas araştırma uygulamalarında, eser miktarda safsızlık bile deneysel sonuçlar üzerinde önemli bir etkiye sahip olabilir. Safsızlıklar potansiyel olarak peptidin biyolojik aktivitesine müdahale edebilir, bu da yanlış pozitiflere veya negatiflere yol açabilir.
İkincisi, ilaçlar gibi bazı endüstrilerdeki düzenleyici gereksinimler, ilaç gelişiminde kullanılan peptitler için çok yüksek bir saflık gerektirir. Bir peptit potansiyel bir terapötik ajan olarak kabul edilirse, herhangi bir kirlilik hasta güvenliği için risk oluşturabilir ve bu nedenle ek saflaştırma adımları esastır.
Kromatografik yöntemler
Ters - Faz Yüksek - Performanslı Sıvı Kromatografisi (RP - HPLC)
RP - HPLC, peptit saflaştırması için en yaygın kullanılan yöntemlerden biridir. Peptitleri hidrofobikliğine göre ayırır. RP - HPLC'deki sabit faz, hidrofobik bir malzemedir, tipik olarak bağlı alkil zincirlerine sahip silika bazlı bir kolon (örn., C18 veya C8). Farklı hidrofobiklere sahip peptitler, sabit faz ile farklı etkileşime girerek farklı tutma sürelerine neden olacaktır.
RP - HPLC kullanarak katalog peptitlerini daha da saflaştırmak için, önce uygun bir mobil faz seçmemiz gerekir. Ortak bir mobil faz, pik şeklini iyileştirmek için az miktarda bir asit (örn. Trifloroasetik asit, TFA) ilave ile su karışımından ve asetonitril veya metanol gibi organik bir çözücüden oluşur. Organik solventin gradyanını ayarlayarak, hedef peptidin safsızlıklardan ayrılmasını optimize edebiliriz.
Örneğin, bir katalog peptidimiz varsaLL-37, antimikrobiyal peptitPotansiyel terapötik uygulamalara sahip bir antimikrobiyal peptit olan RP - HPLC, kalan sentezi - ürünler veya bozulmuş fragmanlarla uzaklaştırmak için kullanılabilir. Saflaştırılmış LL - 37 daha sonra daha doğru antimikrobiyal aktivite deneylerinde kullanılabilir.
İyon - Değişim kromatografisi
İyon - Değişim kromatografisi peptitleri yüklerine göre ayırır. İki ana tip vardır: katyon - değişim kromatografisi (CEX) ve anyon - değişim kromatografisi (AEX). CEX'te, sabit fazın negatif yüklü bir grubu vardır ve net pozitif yüklü peptitler buna bağlanır. AEX'te, sabit faz pozitif yüklenir ve negatif yüklü peptitler korunacaktır.
CEX ve AEX arasındaki seçim, peptidin izoelektrik noktasına (PI) bağlıdır. Peptitin PI'si mobil fazın pH'ının altındaysa, peptit net bir negatif yüke sahip olacak ve AEX kullanılabilir. Tersine, PI mobil fazın pH'ının üzerindeyse, CEX daha uygundur.
Örneğin,Ureistachykininin II, spesifik bir yük profiline sahip bir peptit, iyon değişim kromatografisi kullanılarak daha da saflaştırılabilir. Mobil faz pH'ını ve iyonik mukavemetini dikkatlice seçerek, hedef peptidin diğer yüklü safsızlıklardan iyi bir şekilde ayrılmasını sağlayabiliriz.
Elektroforetik yöntemler
Sodyum dodesil sülfat - Poliakrilamid jel elektroforezi (SDS - Page)
SDS - Page esas olarak protein analizi için kullanılsa da, bir dereceye kadar peptit saflaştırmasına da uygulanabilir. SDS - sayfasında, peptitler SDS tarafından denatüre edilir ve moleküler ağırlıklarına göre ayrılır. Peptitler, bir elektrik alanının etkisi altında bir poliakrilamid jelden göç eder.
Elektroforezden sonra jel, peptitleri görselleştirmek için boyanabilir. Hedef peptide karşılık gelen bant daha sonra jelden eksize edilebilir ve peptit jel matrisinden elüte edilebilir. Ancak, bu yöntemin bazı sınırlamaları vardır. Elüsyon süreci karmaşık olabilir ve saflaştırma sırasında peptit kaybı olabilir. Ayrıca, SDS'nin saflaştırılmış peptitten tamamen uzaklaştırılması zor olabilir.
Kılcal elektroforez (CE)
Kılcal elektroforez, peptitler için güçlü bir ayırma tekniğidir. Yüksek ayırma verimliliği, kısa analiz süresi ve düşük örnek tüketimi sunar. CE, peptitleri yük - kütle oranlarına göre ayırır. Kılcal bölge elektroforezi (CZE), kılcal jel elektroforezi (CGE) ve misel elektrokinetik kromatografi (MEKC) gibi farklı CE modları vardır.
CZE, peptit analizi ve saflaştırma için en sık kullanılan moddur. CZE'de peptitler, bir elektrik alanının altında bir tamponla - dolu kılcal olarak ayrılır. Ayrılma, peptitlerin elektroforetik hareketliliğindeki farklılıklara dayanır. CE, peptit tanımlama ve saflaştırmanın doğruluğunu arttırmak için UV emilimi, floresan ve kütle spektrometresi gibi çeşitli tespit yöntemleri ile birleştirilebilir.
Diğer düşünceler
Çözünürlük
Peptidin çözünürlüğü, saflaştırma işleminde önemli bir faktördür. Bir peptit saflaştırma çözücülerinde zayıf çözünürlüğe sahipse, saflaştırma sırasında peptidin geri kazanımını ve saflığını etkileyecek çökelmeye yol açabilir. Peptit çözünürlüğünü artırmak için, çözücünün pH'ını ayarlayabilir, CO -çözücü ekleyebilir veya spesifik çözündürücü ajanlar kullanabiliriz.
Saflık analizi
Daha fazla saflaştırıldıktan sonra, peptidin saflığını analiz etmek çok önemlidir. Saflık analizi için yaygın yöntemler arasında yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC), kütle spektrometrisi (MS) ve nükleer manyetik rezonans (NMR) bulunur. HPLC, peptidin kromatografik saflığı hakkında bilgi sağlayabilirken, MS peptidin moleküler ağırlığını doğrulayabilir ve farklı kütlelere sahip safsızlıkları saptayabilir. NMR, atomik seviyede peptidin yapısını ve saflığını belirlemek için kullanılabilir.
Çözüm
Bir katalog peptit tedarikçisi olarak, müşterilerimize yüksek kaliteli peptitler sağlamaya kararlıyız. Katalog peptitlerinin daha fazla saflaştırılması gerektiğinde, elimizde kromatografik yöntemler, elektroforetik yöntemler ve çözünürlük ve saflık analizi gibi diğer hususlar da dahil olmak üzere çeşitli yöntemlerimiz var. Uygun saflaştırma yöntemini dikkatlice seçerek ve saflaştırma koşullarını optimize ederek, peptitlerin müşterilerimizin yüksek saflık gereksinimlerini karşılamasını sağlayabiliriz.
Katalog peptitleri için herhangi bir ihtiyacınız varsa veya daha fazla arıtma hizmeti gerektiriyorsanız, lütfen tedarik ve tartışma için bizimle iletişime geçmekten çekinmeyin. Peptit araştırma ve geliştirme ihtiyaçlarınızı karşılamak için sizinle birlikte çalışmayı dört gözle bekliyoruz.
Referanslar
- Snyder, LR, Kirkland, JJ ve Dolan, JW (2010). Modern sıvı kromatografisine giriş. Wiley.
- Jorgenson, JW ve Lukacs, KD (1981). Kılcal bölge elektroforezi. Analitik Kimya, 53 (8), 1298 - 1302.
- Laemmli, İngiltere (1970). Bakteriyofaj başının montajı sırasında yapısal proteinlerin yarılması T4. Doğa, 227 (5259), 680 - 685.