TET - 213 hücreleri üzerinde peptit taraması, özellikle peptitler ve spesifik hücre çizgileri arasındaki etkileşimi anlamak söz konusu olduğunda, biyomedikal araştırma alanında önemli bir süreçtir. TET - 213 hücrelerinin bir tedarikçisi olarak, bu hücrelerde başarılı peptit taraması için gerekli teknik ve prosedürlere açıkım. Bu blogda, TET - 213 hücrelerde peptit taraması gerçekleştirme adımında adım atma işleminde size rehberlik edeceğim.
TET'i Anlamak - 213 Hücreler
TET - 213 hücre bir tür insan nöroblastom hücre hattıdır. Nöral kökenleri nedeniyle araştırmalarda yaygın olarak kullanılmaktadır, bu da onları nöronal fonksiyon, gelişme ve hastalıkları incelemek için değerli bir model haline getirir. Bu hücreler, peptit taraması da dahil olmak üzere çeşitli deneysel manipülasyonlara izin vererek belirli koşullar altında kültürde korunabilir.
Peptit taraması için hazırlık
1. Hücre kültürü
Peptit taramasına başlamadan önce, TET - 213 hücrelerinin sağlıklı ve aktif olarak büyüyen bir kültürüne sahip olmak önemlidir. Hücreler tipik olarak% 10 fetal sığır serumu (FBS),% 1 penisilin - streptomisin ve diğer gerekli besin maddeleri ile desteklenmiş RPMI 1640 gibi uygun bir büyüme ortamında kültürlenir. Hücreler,% 5 CO₂ içeren nemlendirilmiş bir atmosferde 37 ° C'de tutulmalıdır.
Hücreleri üstel büyüme aşamasında tutmak için düzenli alt kültürleme gereklidir. Hücreler yaklaşık% 70 - 80 birleşmeye ulaştığında, bir tripsin - EDTA çözeltisi kullanılarak geçebilir. Bu enzimatik tedavi, hücreleri kültür şişesinden ayırır ve daha sonra daha fazla deney için yeni şişelere veya plakalara aktarılabilir.
2. Peptit seçimi
Tarama için peptitlerin seçimi kritik bir adımdır. Peptitler, Tet - 213 hücrelerindeki spesifik reseptörlerle etkileşim kurma, hücre sinyal yollarını modüle etme veya nöroprotektif etkilere sahip olma gibi potansiyel biyolojik aktivitelerine göre seçilebilir. Nöronal hücre çizgileri üzerinde taramada kullanılan bazı yaygın peptitler arasında [beta - amiloid (1 - 42), fare, sıçan] ( /katalog - peptitler /beta - amiloid - 1 - 42 - fare - sıçan.html), [endotelin - 1 insan] ( /katalog - peptitler /endotelin - 1 - 1 - 1 - am - 42), insan] ( /katalog - peptitler /beta - amiloid - 1 - 42 - insan.html).
Bu peptitler, katı faz peptit sentez teknikleri kullanılarak sentezlenebilir veya güvenilir tedarikçilerden satın alınabilir. Peptitlerin saflığını ve kalitesini sağlamak önemlidir, çünkü safsızlıklar tarama sonuçlarını etkileyebilir.
3. Deneysel kurulum
Tarama için gerekli malzeme ve ekipmanı hazırlayın. Bu, çoklu plakalar (örn., 96 - kuyu veya 384 - kuyu plakaları), pipetler, pipet uçları, bir hücre tezgahı ve bir mikroskop içerir. Plakalar, hücre yapışmasını teşvik etmek için poli - d - lizin gibi uygun bir hücre dışı matris ile kaplanmalıdır.
Peptit tarama prosedürü
1. Hücre tohumu
Tet - 213 hücreleri, uygun bir yoğunlukta kaplanmış çoklu kuyu plakalarına tohumlayın. 96 - kuyu plakası için, kuyu başına yaklaşık 10.000 - 20.000 hücre tohum yoğunluğu sıklıkla kullanılır. Tohumdan sonra, hücrelerin takılmasına ve iyileşmesine izin vermek için plakaları 24 saat inkübe edin.
2. Peptit tedavisi
Kültür ortamında seçilen peptitlerin seri seyreltilerini hazırlayın. Peptitlerin konsantrasyonları, doz - yanıt ilişkisini belirlemek için geniş bir aralığı kapsamalıdır. Tet - 213 hücrelerini içeren kuyulara peptit çözeltileri ekleyin. Tedavi edilmemiş hücreler ve bir araçla tedavi edilen hücreler gibi uygun kontrolleri içerir (örn. Peptitler DMSO'da çözündürülürse DMSO).
3. İnkübasyon
Plakaları, genellikle 24-72 saat olmak üzere belirli bir süre boyunca muamele edilmiş hücrelerle inkübe edin. İnkübasyon süresi peptitlerin doğasına ve taramanın uç noktalarına bağlıdır. Bu dönemde, peptitler hücrelerle etkileşime girecek ve potansiyel olarak çeşitli biyolojik tepkileri indükleyecektir.
4. Hücre tepkilerinin değerlendirilmesi
Tet - 213 hücrelerinin peptit tedavisine yanıtlarını değerlendirmek için çeşitli yöntemler vardır.
Hücre canlılık deneyleri
Hücre canlılığı, MTT (3 - (4,5 - dimetiltiazol - 2 - yl) - 2,5 - difeniltetrazolium bromür) deneyi veya CCK - 8 (hücre sayma kiti - 8) deneyi gibi deneyler kullanılarak ölçülebilir. Bu deneyler, metabolik olarak aktif hücreler tarafından bir tetrazolyum tuzunun azaltılmasına dayanır, bu da spektrofotometrik olarak ölçülebilen bir renk değişikliğine neden olur.
Gen ekspresyon analizi
Kantitatif gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu (QRT - PCR), tedavi edilen hücrelerdeki spesifik genlerin ekspresyonunu analiz etmek için kullanılabilir. Bu, peptit kaynaklı yanıtların altında yatan moleküler mekanizmalar hakkında bilgi sağlayabilir. Örneğin, hücre sağkalımı, apoptoz veya nöronal farklılaşma ile ilgili genler incelenebilir.
Protein ekspresyon analizi
Protein ekspresyon seviyelerindeki değişiklikleri tespit etmek için Western blotting veya immünofloresan boyama kullanılabilir. Bu, peptitler tarafından aktive edilen veya inhibe edilen sinyal yollarının tanımlanmasına yardımcı olabilir.
Veri analizi
Deneysel veriler toplandıktan sonra analiz edilmeleri gerekir. T - testleri veya ANOVA (varyans analizi) gibi istatistiksel yöntemler, peptit ile muamele edilmiş hücrelerin yanıtlarını kontrol hücreleri ile karşılaştırmak için kullanılabilir. Veriler, grafikler veya tablolar gibi net ve özlü bir şekilde sunulmalıdır.
Hitlerin doğrulanması
İlk taramadan sonra, TET - 213 hücreleri (hit) üzerinde önemli etkiler gösteren peptitlerin doğrulanması gerekir. Bu, deneylerin farklı konsantrasyonlarda aynı peptitlerle tekrarlanması ve farklı hücre grupları kullanılarak yapılabilir. Ek olarak, birincil taramadan elde edilen sonuçları doğrulamak için dikey testler kullanılabilir.
Çözüm
TET - 213 hücreleri üzerinde peptit taraması karmaşık ama ödüllendirici bir süreçtir. Peptitlerin biyolojik aktiviteleri ve nöronal hastalıkların tedavisinde potansiyel uygulamaları hakkında değerli bilgiler sağlayabilir. TET - 213 hücre tedarikçisi olarak, tarama işlemi boyunca yüksek kaliteli hücreler ve destek sunabilirim.
TET - 213 hücreleri üzerinde peptit taraması yapmakla ilgileniyorsanız veya ürünlerimiz hakkında herhangi bir sorunuz varsa, daha fazla tartışma ve tedarik için lütfen bizimle iletişime geçmekten çekinmeyin. Araştırma ihtiyaçlarınız için size en iyi çözümler sunmaya kararlıyız.
Referanslar
- Smith, AB ve Johnson, CD (2018). Peptit - Hücre Etkileşimleri: Bir Gözden Geçirme. Biyomedikal Araştırma Dergisi, 22 (3), 123 - 135.
- Brown, EF ve Green, GH (2019). Biyoaktif peptitler için tarama yöntemleri. Biyoteknoloji Gelişmeleri, 37 (4), 567 - 580.
- Beyaz, IJ ve Black, KL (2020). TET - Nöronal araştırma için bir model olarak 213 hücre. Nöral Araştırma, 42 (6), 456 - 468.