Hey, diğer hücre meraklıları! TET - 213 hücrelerinin bir tedarikçisi olarak, bu eşsiz hücrelerle ilgili deneyimlerden adil payımı aldım. Bu blogda, TET - 213 hücrelerinin yaşayabilirliğini nasıl koruyacağına dair bazı ipuçlarını paylaşacağım.
Öncelikle, 213 hücrenin ne olduğunu anlayalım. Sinirbilim ve kanser çalışmaları gibi çeşitli araştırma alanlarında büyük bir potansiyel gösteren bir hücre çizgisi türüdür. Ancak onları canlı tutmak ve tekmelemek parkta her zaman bir yürüyüş değildir.
Hücre kültür ortamı
Herhangi bir hücre hattını korumanın temeli doğru kültür ortamıdır. TET - 213 hücre için, yüksek kaliteli bir ortam bir zorunluluktur. Genellikle temel besin maddeleri bakımından zengin bir ortam kullanmanızı öneririm. % 10 fetal sığır serumu (FBS), penisilin ve streptomisin ile desteklenen RPMI 1640 ortamı benim için harikalar yarattı. FBS, bu hücrelerin gelişmesi gereken büyüme faktörlerini ve hormonlarını sağlarken, antibiyotikler kontaminasyonu önlemeye yardımcı olur.
Ortamı uygun şekilde sakladığınızdan emin olun. 4 ° C'de tutun ve ışıktan koruyun. Kullanmadan önce, bir su banyosunda 37 ° C'ye kadar ısıtın. Bu vücut sıcaklığını taklit eder ve hücreler için daha rahattır.
Kuluçka koşulları
TET - 213 hücre çevreleri hakkında oldukça seçicidir. % 5 co₂ ile nemlendirilmiş bir atmosferde 37 ° C'de inkübe edilmeyi severler. Bu ortam, insan vücudundaki fizyolojik koşullara çok benzemektedir.
İyi bir inkübatöre yatırım yapın. Kararlı bir sıcaklık ve co₂ kontrolü olmalıdır. Her şeyin yolunda olduğundan emin olmak için inkübatörün ayarlarını ve kalibrasyonunu düzenli olarak kontrol edin. Ayrıca, kirleticilerin yapımını önlemek için inkübatörü düzenli olarak temizleyin.
Alt kültürleme
Alt kültürleme, hücre canlılığını korumada önemli bir adımdır. TET - 213 hücre yaklaşık% 80 - 90 konfluance ulaştığında, onları bölme zamanı. İlk olarak, eski ortamı çıkarın ve herhangi bir enkazdan kurtulmak için hücreleri fosfat - tamponlu salin (PBS) ile yıkayın. Ardından, hücreleri kültür şişesinden ayırmak için tripsin - EDTA çözeltisi ekleyin. Hücreler yuvarlanmaya ve ayırmaya başlayana kadar şişeyi birkaç dakika 37 ° C'de inkübe edin.
Hücreler ayrıldıktan sonra, tripsin nötralize etmek için taze ortam ekleyin. Hücreleri peletlemek için hücre süspansiyonunu düşük hızda santrifüjleyin. Peleti taze ortamda yeniden süspirin ve hücreleri uygun tohumlama yoğunluğunda yeni kültür şişelerine aktarın. Yaklaşık 5 x 10⁴ hücre/cm²'lik bir tohum yoğunluğu genellikle TET - 213 hücre için iyi çalışır.
Hücre Sağlığını İzleme
Tet - 213 hücrenizin sağlığını düzenli olarak izlemek çok önemlidir. Hücre morfolojisini kontrol etmek için bir faz - kontrast mikroskobu kullanın. Sağlıklı Tet - 213 hücreler tekdüze bir şekle sahip olmalı ve şişeye iyi bağlanmalıdır. Yüzen hücreler veya anormal hücre şekilleri gibi herhangi bir hücre ölümü belirtisi fark ederseniz, bir sorunun işareti olabilir.
Ayrıca Trypan Blue hariç tutma testi gibi bir canlılık testi de gerçekleştirebilirsiniz. Hücre süspansiyonunuzun az bir kısmını tripan mavisi ile karıştırın. Canlı hücreler boyayı hariç tutarken, ölü hücreler onu alıp mavi görünecektir. Hücre canlılığı yüzdesini hesaplamak için bir hemositometre kullanarak canlı ve ölü hücre sayısını sayın.
Reaktiflerin kalitesi
Yüksek kaliteli reaktifler kullanmak müzakere edilemez. FBS, antibiyotikler ve diğer katkı maddelerinin kalitesi, hücre canlılığı üzerinde önemli bir etkiye sahip olabilir. FBS seçerken, hücre büyümesini destekleme yeteneği açısından test edilmiş bir parti arayın. Sabit olarak saklanan süresi dolmuş reaktifleri veya reaktifleri kullanmaktan kaçının.
Dikkate alınması gereken diğer bazı faktörler, Tet - 213 hücreleri ile birlikte kullanılabilecek peptitlerdir. Örneğin,Melanosit proteini PMEL 17 (130 - 138) (insan)bazı araştırmalarda hücre sinyali ile ilgili potansiyel göstermiştir.Urechistachinin IVeDynorphin A (1 - 17)ayrıca TET - 213 hücre araştırması bağlamında araştırılabilen peptitlerdir.
Sorun giderme
Tet - 213 hücrenizin yaşayabilirliğini korumakla ilgili sorunlarınız varsa, panik yapmayın. İşte bazı yaygın sorunlar ve çözümler:
Kirlenme: Ortadaki bulutluk veya görünür koloniler gibi bakteriyel veya mantar kontaminasyonu belirtileri görürseniz, kirlenmiş kültürleri hemen atın. İnkübatörü ve tüm ekipmanı iyice temizleyin. Hücreleri kullanırken katı aseptik teknikleri takip ettiğinizden emin olun.
Kötü hücre büyümesi: Hücreler iyi büyüyorsa, kültür ortamını kontrol edin. Ortam eski olabilir veya takviyeler düzgün çalışmıyor olabilir. Ayrıca, kuluçka koşullarının doğru olduğundan emin olun. Bazen, sıcaklık veya co₂ konsantrasyonundaki hafif bir değişiklik hücre büyümesini etkileyebilir.
Hücre dekolmanı: Hücreler çok kolay ayrılıyorsa, bunun nedeni aşırı tripsinizasyon olabilir. Bir dahaki sefere tripsin inkübasyon süresini azaltın. Ayrıca, tripsin - EDTA çözeltisinin taze olduğundan emin olun.
Sonuç olarak, TET - 213 hücrelerinin yaşayabilirliğini korumak, detaylara dikkat ve ihtiyaçlarının iyi anlaşılmasını gerektirir. Bu ipuçlarını izleyerek, TET - 213 hücrelerinizi sağlıklı ve üretken tutabilirsiniz.
Yüksek kaliteli TET - 213 hücre pazarındaysanız, sizinle sohbet etmeyi çok isterim. İster küçük ölçekli bir proje veya büyük ölçekli bir biyoteknoloji şirketi üzerinde çalışan bir araştırmacı olun, size ihtiyacınız olan hücreleri sağlayabilirim. Gereksinimleriniz ve birlikte nasıl çalışabileceğimiz hakkında bir konuşma başlatmak için ulaşın.
Referanslar
- Freshney, RI (2016). Hayvan hücrelerinin kültürü: Temel teknik ve özel uygulamalar kılavuzu. Wiley.
- Doyle, A. ve Griffiths, JB (2012). Hücre ve doku kültürü: laboratuvar prosedürleri. Wiley - Blackwell.