Sistemin, bitkinin otçullara ve patojenlere karşı savunma tepkisinde önemli bir rol oynayan, iyi bilinen bir bitki peptid hormonudur. Lider bir Systemin tedarikçisi olarak, bitkilerde Systemin'in nasıl tespit edileceğini anlamak, yalnızca bilimsel araştırmalar için değil, aynı zamanda sunduğumuz Systemin ürünlerinin kalitesini ve orijinalliğini sağlamak açısından da son derece önemlidir. Bu blogda, bitkilerde Systemin'i tespit etmenin çeşitli yöntemlerini keşfedeceğiz ve her yaklaşımın arkasındaki bilimsel ilkeleri derinlemesine inceleyeceğiz.
1. İmmünolojik Tespit Yöntemleri
İmmünolojik tespit teknikleri, yüksek özgüllükleri ve hassasiyetleri nedeniyle bitkilerde Sistemin tespitinde yaygın olarak kullanılmaktadır. Bu yöntemler, Sistemini spesifik olarak tanıyan ve ona bağlanan antikorların kullanımına dayanır.
Enzim - Bağlantılı İmmünosorbent Testi (ELISA)
ELISA yaygın olarak kullanılan bir immünolojik yöntemdir. Bir mikroplakanın Systemin'e özgü bir antikorla kaplanmasını içerir. Daha sonra mikroplakanın kuyucuklarına bitki özleri eklenir. Ekstraktta Systemin mevcutsa hareketsizleştirilmiş antikora bağlanacaktır. Daha sonra bir enzimle konjuge edilmiş ikinci bir antikor eklenir. Bu ikincil antikor aynı zamanda Sistemin'e de bağlanır. Bağlanmayan maddeler yıkandıktan sonra enzim için bir substrat eklenir. Enzim-substrat reaksiyonu, fotometrik olarak ölçülebilen, çoğunlukla renk değişimi olan, saptanabilir bir sinyal üretir. Sinyalin yoğunluğu numunedeki Sistemin miktarıyla orantılıdır.
ELISA'nın avantajları arasında yüksek hassasiyeti, birden fazla numuneyi aynı anda işleyebilme yeteneği ve göreceli kullanım kolaylığı sayılabilir. Bununla birlikte, yüksek kaliteli antikorların üretimini gerektirir ve bitki ekstraktındaki diğer peptitlerle çapraz reaktivite bazen sorun olabilir.
Western Blotlama
Western blotlama başka bir güçlü immünolojik tekniktir. İlk olarak bitki proteinleri jel elektroforezi ile moleküler ağırlıklarına göre ekstrakte edilir ve ayrılır. Ayrılan proteinler daha sonra bir zara aktarılır. Systemin'e özgü bir antikor membranla inkübe edilir. Yıkamadan sonra, bir tespit reaktifi (floresan veya kemilüminesan işaretleyici gibi) ile konjuge edilmiş ikincil bir antikor eklenir. Sistemin varlığı membran üzerinde belirgin bir bant olarak görselleştirilir.
Western blot, Sisteminin moleküler ağırlığının belirlenmesine olanak tanır ve olası modifikasyonları hakkında bilgi sağlayabilir. Ancak ELISA ile karşılaştırıldığında daha fazla zaman alıcı ve teknik açıdan zahmetlidir.
2. Kütle Spektrometresi Tabanlı Tespit
Kütle spektrometrisi (MS), bitkilerde Sistemin tespitine yönelik oldukça doğru ve çok yönlü bir yöntemdir. Peptitleri kütle-yük oranlarına (m/z) göre tanımlayabilir ve ölçebilir.
Sıvı Kromatografisi - Kütle Spektrometrisi (LC - MS)
LC - MS'de bitki ekstraktları öncelikle sıvı kromatografi ile ayrılır. Ayrılan bileşenler daha sonra bir kütle spektrometresine eklenir. Kütle spektrometresi molekülleri iyonize ederek m/z değerlerini ölçer. Elde edilen m/z değerlerini Systemin'in teorik m/z'si ile karşılaştırarak Systemin'in varlığı doğrulanabilir.
LC - MS, karmaşık bitki matrislerinde bile yüksek çözünürlük ve Systemin'i tespit etme yeteneği sunar. Ayrıca Systemin'in yapısı ve olası çeviri sonrası değişiklikleri hakkında bilgi sağlayabilir. Ancak pahalı ekipman ve yüksek eğitimli personel gerektirir.
Tandem Kütle Spektrometresi (MS/MS)
MS/MS, kütle spektrometrisinin bir uzantısıdır. İlk kütle spektrometresindeki ilk kütle analizinden sonra seçilen iyonlar parçalanır ve parçalar ikinci bir kütle spektrometresinde analiz edilir. Bu, kimliğinin doğrulanması için gerekli olan Sisteminin amino asit dizisinin belirlenmesine olanak tanır.
MS/MS, tanımlamaya müdahale edebilecek izobarik veya izomerik peptidlerin bulunabileceği örneklerle uğraşırken özellikle faydalıdır. Systemin hakkında ayrıntılı yapısal bilgi sağlar ancak aynı zamanda tek aşamalı kütle spektrometresinden daha karmaşık ve zaman alıcıdır.
3. Moleküler Biyoloji Temelli Tespit
Sisteminin gen ekspresyonu düzeyinde tespit edilmesi için moleküler biyoloji teknikleri de kullanılabilir.
Ters Transkripsiyon - Polimeraz Zincir Reaksiyonu (RT - PCR)
RT - PCR, Systemin'i kodlayan mRNA'yı tespit etmek için kullanılır. İlk olarak bitki dokularından toplam RNA ekstrakte edilir. Daha sonra mRNA ters transkriptaz kullanılarak tamamlayıcı DNA'ya (cDNA) ters kopyalanır. Systemin genine yönelik spesifik primerler, cDNA'nın PCR ile amplifikasyonu için kullanılır. Amplifiye edilmiş DNA fragmanları jel elektroforezi ile görselleştirilebilir.
RT - PCR, savunma tepkisi açısından bitkinin fizyolojik durumunu gösterebilen Systemin gen ifadesinin tespitine olanak tanır. Bununla birlikte, yalnızca transkripsiyonel düzeyde Systemin'in potansiyel üretimi hakkında bilgi sağlar ve doğrudan peptidin varlığını ölçmez.
Kantitatif Gerçek Zamanlı PCR (qRT - PCR)
qRT - PCR, RT - PCR'nin daha gelişmiş bir versiyonudur. Numunedeki Systemin mRNA miktarının ölçülmesine olanak sağlar. PCR reaksiyonu sırasında amplifikasyonu gerçek zamanlı olarak izlemek için bir floresan boya veya floresan etiketli bir prob kullanılır. Floresan sinyalinin bir eşiği (Ct değeri) geçtiği döngü, hedef mRNA miktarıyla ters orantılıdır.
qRT - PCR, geleneksel RT - PCR'ye kıyasla Sistemin gen ekspresyonunun daha doğru ölçülmesini sağlar. Farklı uyaranlara yanıt olarak Systemin üretiminin düzenlenmesini incelemek için faydalıdır.
4. Biyoanaliz Tabanlı Tespit
Biyoanalizler, Systeminin varlığını tespit etmek için biyolojik aktivitesine dayanır. Örneğin, Systemin'in bitkilerde proteaz inhibitörlerinin sentezini indüklediği bilinmektedir. Bitki dokularının Sistemin içerdiğinden şüphelenilen bir numuneyle işlenmesi ve ardından proteaz inhibitörlerinin indüksiyonunun ölçülmesi yoluyla bir biyoanaliz yapılabilir.
Biyoanalizlerin avantajı, Sisteminin biyolojik aktivitesini doğrudan ölçmeleridir. Bununla birlikte, diğer yöntemlere kıyasla daha az spesifiktirler ve bitki ekstraktındaki proteaz inhibitör sentezini de etkileyebilecek diğer faktörlerden etkilenebilirler.
Çözüm
Bir Systemin tedarikçisi olarak doğru ve güvenilir Systemin tespitinin önemini anlıyoruz. Yukarıda açıklanan yöntemlerin her birinin kendi avantajları ve sınırlamaları vardır. İmmünolojik yöntemler son derece spesifik ve hassastır, kütle spektrometrisi ayrıntılı yapısal bilgi sağlar, moleküler biyoloji teknikleri gen ekspresyonuna ilişkin bilgiler sunar ve biyoanalizler biyolojik aktiviteyi ölçer. Uygulamada, bitkilerde Systemin'in doğru tespitini ve miktarının belirlenmesini sağlamak için bu yöntemlerin bir kombinasyonu kullanılabilir.
Araştırmanız veya diğer uygulamalarınız için yüksek kaliteli Systemin satın almakla ilgileniyorsanız, daha detaylı görüşmeler için sizi bizimle iletişime geçmeye davet ediyoruz. Size en iyi ürün ve hizmetleri sunmaya kararlıyız. Ayrıca diğer peptit ürünlerimizden bazıları da ilginizi çekebilir:Glikoprotein IIb Parçası (296 - 306),PHM - 27 (insan), VeSekretin (sıçan).
Referanslar
- Ryan, CA (2000). Sistemin sinyal yolu: bitki savunma genlerinin diferansiyel aktivasyonu. Biochimie, 82(10 - 11), 847 - 853.
- Schilmiller, AL ve Howe, GA (2005). Sistemin: Bitki savunma tepkileri için bir polipeptit sinyali. Güncel Biyoloji, 15(18), R744 - R747.
- van der Hoorn, RA ve Jones, JD (2004). Patojen savunmasında proteazlar. Bitki Biyolojisinde Güncel Görüş, 7(4), 400 - 406.