Peptit aktif farmasötik bileşenler (API'lar), yüksek özgüllüğü, düşük toksisiteleri ve çok çeşitli hastalıkların tedavisi potansiyeli nedeniyle farmasötik endüstrisinde önemli ilgi görmüştür. Önde gelen bir peptit APIS tedarikçisi olarak, ileri sentez yöntemleri aracılığıyla yüksek kaliteli peptit ürünleri sağlamaya kararlıyız. Bu blogda, peptit API'lerin sentezlenmesinin çeşitli yollarını inceleyeceğiz.
Katı - Faz Peptit Sentezi (SPP'ler)
Katı -faz peptit sentezi, peptit API'leri sentezlemek için en yaygın kullanılan yöntemlerden biridir. Bu yaklaşım, 1963 yılında Robert Bruce Merrifield tarafından öncülük etti ve peptit sentezini devrim yarattı ve 1984'te Nobel Kimya Ödülü'nü kazandı.
SPP'lerin temel prensibi, birinci amino asidin C - terminalinin reçine gibi çözünmeyen bir katı desteğe bağlanmasını içerir. Bu reçine, sonraki kimyasal reaksiyonlar için kararlı bir platform sağlar. Bağlı amino asidin amino grubu, tipik olarak FMOC (9 - florenilmetiloksikarbonil) veya BOC (tert - butiloksikarbonil) olmak üzere uygun bir koruma grubu ile korunur.
Reçineye ilk amino asit bağlandıktan sonra, amino grubundaki koruma grubu çıkarılır ve reaktif amino grubunu ortaya çıkarır. Bir sonraki amino asit, aynı zamanda amino grubu korumalı olarak, daha önce bir bağlantı reaktifi kullanılarak daha önce bağlı amino asidin serbest amino grubuna bağlanır. Yaygın olarak kullanılan bağlantı reaktifleri arasında DIC (n, n ' - diizopropilkarbodiimid), HBTU (O - benzotiazol - n, n', n ' - tetrametil - uronium - heksafluoro - fosfat) ve hatu (o - (7 - azabenzotriazol - 1 -yl) - n, n, n, n, n, n, n, n, n, n, n, n, n, n, n, n, n, n, n, n, n, n, n, n, n, n, n, n, n, n, n, n, n, n, tetrametiluronyum heksaflorofosfat).
Her bir bağlantı aşamasından sonra, silme dizilerinin oluşumunu önlemek için reaksiyona girmemiş amino grupları sınırlandırılır. Bu genellikle asetik anhidrit kullanılarak yapılır. İstenen peptit sekansındaki her amino asit için koruma, birleştirme ve kaplama döngüsü tekrarlanır.
Tüm peptit sekansı reçine üzerine birleştirildikten sonra, peptit bir bölünme kokteyli kullanılarak reçineden ayrılır. Bu kokteyl ayrıca sentez sırasında amino asitler üzerinde bulunan herhangi bir yan zincir koruyucu grupları çıkarır. Bölünmüş peptit daha sonra yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC) gibi yöntemlerle saflaştırılır.
Çözelti - faz peptit sentezi
Çözüm - Faz peptit sentezi daha eski bir yöntemdir, ancak yine de belirli durumlarda avantajları vardır. Bu yöntemde, tüm reaksiyonlar çözeltide gerçekleşir ve peptit katı bir desteğe bağlı değildir.
Sentez, bireysel amino asitlerin amino ve karboksil gruplarının korunmasıyla başlar. SPP'lere benzer şekilde, amino grubu için FMOC veya BOC gibi koruma grupları kullanılır ve ester grupları karboksil grubunu korumak için kullanılır.
İlk adım, bir dipeptid oluşturmak için iki korunan amino asidin birleştirilmesidir. Bu, SPP'lerde kullanılanlara benzer bir bağlantı reaktifi kullanılarak elde edilir. Dipeptit oluşumundan sonra, dipeptidin bir ucundaki koruyucu gruplar çıkarılır ve daha sonra daha uzun bir peptit oluşturmak için başka bir korunan amino asit veya dipeptit ile birleştirilir.
İşlem, istenen peptit sekansı elde edilene kadar adım adım tekrarlanır. Çözelti - faz sentezinin zorluklarından biri, reaksiyon karışımı çeşitli ürünler ve reaksiyona girmemiş başlangıç malzemeleri içerdiğinden, her aşamada ara peptitlerin saflaştırılmasıdır. Saflaştırma tipik olarak ekstraksiyon, kristalizasyon veya kromatografi ile gerçekleştirilir.
Kimyasal ligasyon
Kimyasal ligasyon, geleneksel SPP'ler veya çözelti - faz sentezi kullanarak monte edilmesi zor olan büyük peptitlerin veya proteinlerin sentezlenmesi için güçlü bir yöntemdir. En iyi bilinen kimyasal ligasyon yöntemlerinden biri doğal kimyasal ligasyondur (NCL).
NCL'de, C - terminal tioester ile bir peptit, N - terminal sistein tortusu ile başka bir peptit ile reaksiyona girer. Reaksiyon, hafif sulu koşullar altında meydana gelir ve iki peptit arasında doğal bir peptit bağının oluşmasına neden olur.
İşlem önce SPP'ler veya çözelti - faz sentezi kullanarak iki veya daha fazla peptit segmentinin sentezlenmesini içerir. Bir segment bir C - terminal tioester ile, diğeri N -terminal sistein ile hazırlanır. Bu segmentler daha sonra uygun bir tamponla karıştırılır ve ligasyon reaksiyonu gerçekleşir. Ligasyondan sonra, gerekirse, sistein kalıntısı daha fazla modifiye edilebilir veya ek kimyasal reaksiyonlar için bir sap olarak kullanılabilir.
Yakınsak sentezi
Yakınsak sentez, hem SPP'lerin hem de kimyasal ligasyonun avantajlarını birleştiren bir stratejidir. Peptit, tüm peptit sekansını doğrusal bir şekilde sentezlemek yerine, SPP'ler kullanılarak ayrı olarak sentezlenen daha küçük segmentlere ayrılır.
Bu segmentler daha sonra kimyasal ligasyon yöntemleri kullanılarak birbirine bağlanır. Bu yaklaşım, nihai ürünün genel verimini ve saflığını artırabilen büyük peptitlerin sentezi için gereken birleştirme aşamalarının sayısını azaltır. Örneğin, uzun bir peptit, her biri 10-20 amino asit içeren üç veya dört segmente ayrılabilir. Bu segmentler reçine üzerinde sentezlenir, parçalanır ve daha sonra yakınsak bir şekilde bağlanır.
Peptit API'lerimizin örnekleri
Dahil olmak üzere çok çeşitli peptit API'ler sunuyoruz.C20 - OTB - Glu (OBBU) - ATBI10 - ATBU) Fotoğraflar - Oie - Oana - OE-C20 (OTBU) - Glu (OTBU), VePalmitoyl - Glu (OSU) - Otbu. Bu peptitler, yüksek saflık ve kalite sağlayarak yukarıda açıklanan gelişmiş yöntemler kullanılarak sentezlenir.
Peptit API sentezinde kalite kontrolü
Kalite kontrolü, peptit API'lerin sentezinde çok önemlidir. Ürünlerimizin en yüksek standartları karşılamasını sağlamak için kapsamlı bir kalite kontrol sistemimiz var.
Sentezden sonra peptit, HPLC, kütle spektrometresi (MS) ve nükleer manyetik rezonans (NMR) dahil olmak üzere çeşitli tekniklerle analiz edilir. HPLC, peptidin saflığını belirlemek için kullanılırken, MS peptidin moleküler ağırlığını doğrulamak için kullanılır. NMR, peptidin yapısı ve konformasyonu hakkında bilgi sağlayabilir.
Ayrıca, peptit API'lerin farklı depolama koşulları altında stabil kalmasını sağlamak için istikrar çalışmaları yürütüyoruz. Bu, peptidin farklı sıcaklıklarda, pH değerlerinde ve çeşitli eksipiyanların varlığında test edilmesini içerir.
Çözüm
Peptit API'lerin sentezi, gelişmiş teknikler ve katı kalite kontrolü gerektiren karmaşık ve çok adımlı bir işlemdir. Bir peptit APIS tedarikçisi olarak, sentezimizin verimliliğini ve kalitesini artırmak için sürekli olarak yeni yöntemler ve teknolojiler araştırıyoruz. Katı -faz peptit sentezi, çözelti - faz sentezi, kimyasal ligasyon veya yakınsak sentez yoluyla olsun, müşterilerimize yüksek kaliteli peptit ürünleri sağlamaya kararlıyız.
Peptit API'lerimizi satın almakla ilgileniyorsanız veya peptit sentezi hakkında herhangi bir sorunuz varsa, lütfen tedarik tartışmaları için bizimle iletişime geçmekten çekinmeyin. Peptit API ihtiyaçlarınızı karşılamak için sizinle birlikte çalışmayı dört gözle bekliyoruz.
Referanslar
- Fields, GB ve Noble, RL (1990). 9 - florenilmetoksikarbonil amino asitler kullanılarak katı - faz peptit sentezi. Uluslararası Peptit ve Protein Araştırmaları Dergisi, 35 (2), 161 - 214.
- Dawson, PE, Muir, TW, Clark - Lewis, I. ve Kent, SBH (1994). Proteinlerin doğal kimyasal ligasyon ile sentezi. Bilim, 266 (5186), 776 - 779.
- Chan, WC ve White, PD (2000). FMOC katı faz peptit sentezi: pratik bir yaklaşım. Oxford University Press.