Katalog peptidleri nasıl ölçülür?
Selam! Ben katalog peptit tedarikçisiyim ve bugün bu küçük adamların miktarını nasıl belirleyeceğimiz hakkında konuşmak istiyorum. Peptitler araştırmadan ilaca kadar pek çok alanda çok önemlidir ve doğru bir miktar elde etmek çok önemlidir.
Öncelikle neden katalog peptidlerini ölçmemiz gerektiğinden bahsedelim. Tıp alanındaki araştırmacılar veya kişiler peptidleri kullanırken tam olarak ne kadar çalıştıklarını bilmeleri gerekir. İster bir laboratuvar deneyi, ister klinik bir deney, ister yeni bir ilaç geliştirmek olsun, kesin miktarlar önemlidir. Çok az kullanırsanız sonuçlarınız doğru olmayabilir, çok fazla kullanırsanız her şeyi bozabilirsiniz.
Peki bunu nasıl yapacağız? Birkaç farklı yöntem var ve bunları sizin için ayrıntılarıyla anlatacağım.
En yaygın yollardan biri UV - Vis spektroskopisidir. Bu yöntem, peptidlerin belirli dalga boylarında ultraviyole ve görünür ışığı absorbe etmesi gerçeğinden yararlanır. Triptofan, tirozin ve fenilalanin gibi amino asitlerin belirli emilim özellikleri vardır. Peptitimizin bir çözeltisi yoluyla belirli bir dalga boyunda ışık tuttuğumuzda, bu ışığın ne kadarının emildiğini ölçebiliriz. Peptitin absorpsiyon değerine ve bilinen yok olma katsayısına (amino asit bileşimiyle ilişkili olan) dayanarak, çözeltideki peptidin konsantrasyonunu hesaplayabiliriz. Örneğin, yüksek miktarda triptofan içeren bir peptidimiz varsa, 280 nm civarında daha fazla ışık emecektir. Konsantrasyonu hesaplamak için Beer-Lambert yasasını temel alan basit bir formül kullanıyoruz. Nispeten hızlı ve kolay bir yöntemdir ancak bazı sınırlamaları vardır. Peptit çözeltisindeki kirletici maddeler aynı dalga boylarındaki ışığı da emebilir ve bu da ölçümlerimizi boşa çıkarabilir.
Bir diğer popüler yöntem ise Bradford tahlilidir. Bu, Coomassie Brilliant Blue G - 250 adı verilen bir boyaya dayanan kolorimetrik bir analizdir. Bu boya, peptite bağlandığında renk değiştirir. Daha sonra renkli çözeltinin absorbansını belirli bir dalga boyunda (genellikle 595 nm civarında) ölçebiliriz. Renk değişiminin miktarı çözeltideki peptid miktarıyla orantılıdır. Bir referans peptidin bilinen konsantrasyonlarını kullanarak standart bir eğri oluştururuz ve ardından bilinmeyen peptid örneğimizin absorbansını, konsantrasyonunu belirlemek için bu eğriyle karşılaştırırız. Bradford testi oldukça hassastır ancak numunedeki deterjanlar veya tuzlar gibi belirli maddelerden etkilenebilir.
HPLC veya yüksek performanslı sıvı kromatografisi de peptit ölçümünde yaygın olarak kullanılır. HPLC'de, hidrofobikliği gibi kimyasal özelliklerine dayanarak peptidi numunedeki diğer bileşenlerden ayırırız. Peptit çözeltisini sabit fazla doldurulmuş bir sütuna enjekte ediyoruz ve ardından peptidi sütun boyunca itmek için hareketli bir faz (sıvı bir çözücü) kullanıyoruz. Farklı peptitler sütun boyunca farklı hızlarda hareket edecektir ve bunları genellikle bir UV detektörü olan bir detektör kullanarak sütundan çıktıklarında tespit edebiliriz. İlgilendiğimiz peptidin tepe alanını bilinen standartların tepe alanlarıyla karşılaştırarak konsantrasyonunu hesaplayabiliriz. HPLC harikadır çünkü karmaşık karışımlarda bile peptitleri ayırabilir ve ölçebilir, ancak biraz daha zaman alıcıdır ve özel ekipman gerektirir.
Şimdi sunduğumuz bazı katalog peptidlerden biraz bahsedelim. AlmakEntero-HylambatinÖrneğin. Bu peptidin miktarını belirlerken en doğru sonucu elde etmek için bu yöntemlerin bir kombinasyonunu kullanırız. Konsantrasyonun kaba bir tahminini elde etmek için önce UV - Vis spektroskopisini kullanıyoruz ve ardından bunu HPLC ile iki kez kontrol ediyoruz. Bu şekilde numunedeki olası kirletici maddeleri veya müdahaleleri hesaba katabiliriz.
Bir diğeri iseE[c(RGDyK)]2. Bu peptidin bazı benzersiz özellikleri vardır ve miktarını belirlerken çok dikkatli olmamız gerekir. Spesifik amino asit bileşimi nedeniyle Bradford tahlili burada en iyi seçim olmayabilir, bu nedenle HPLC ve UV - Vis spektroskopisine daha çok güveniyoruz.
Ve sonra varMazdutid (Lys20(N₃-CH₂CO-)). Bu daha karmaşık bir peptiddir ve biz çok adımlı bir yaklaşım kullanıyoruz. İlk okumayı elde etmek için UV - Vis ile başlıyoruz, ardından onu herhangi bir yabancı maddeden ayırmak ve daha doğru bir ölçüm elde etmek için HPLC'yi kullanıyoruz.
Şirketimizde kalite kontrolü çok önemlidir. Katalog peptidlerimizin miktarını belirlerken katı protokollere uymaya dikkat ediyoruz. Her partide birden fazla test yürütüyoruz ve doğruluğundan emin olmak için sonuçlarımızı sertifikalı referans malzemelerle karşılaştırıyoruz. Müşterilerimizin satın aldıkları peptitlere tam olarak güvenebilmeleri için tüm ölçüm verilerinin ayrıntılı kayıtlarını da tutuyoruz.
Yüksek kaliteli katalog peptidleri pazarındaysanız ve doğru miktar belirlemeye ihtiyacınız varsa, size yardımcı olmak için buradayız. İster bir sonraki büyük deneyiniz için peptit arayan bir araştırmacı olun, ister yeni bir ilaç geliştiren bir ilaç şirketi olun, ihtiyacınız olan peptitlere sahibiz. Uzmanlardan oluşan ekibimiz, ürünlerimiz veya ölçüm süreciyle ilgili sorularınızı yanıtlamak için her zaman hazırdır. Bu nedenle, peptit ihtiyaçlarınız hakkında bize ulaşmaktan ve bir konuşma başlatmaktan çekinmeyin. Projelerinize en iyi çözümleri bulmak için sizinle birlikte çalışmaya hazırız.
Referanslar
- Kapsamlar, RK (1994). Protein Saflaştırması: İlkeler ve Uygulama. Springer.
- Skoog, DA, Batı, DM, Holler, FJ ve Crouch, SR (2013). Analitik Kimyanın Temelleri. Öğrenmeyi Başlatın.
- Bollag, DM, Rozycki, MD ve Edelstein, SJ (1996). Protein Yöntemleri. wiley - liss.